Efecto del cambio climático en las fertilización y embriogénesis de Paracentrotus lividus

              Rev. Real Acad. Canar. Cienc., Vol. XXVI, 251-262 (diciembre de 2014)
EFECTO DEL CAMBIO CLIMATICO EN LA FERTILIZACION
Y EMBRIOGENESIS DE Paracentrotus lividus
Gonzalez-Delgado, S., Hernandez, J.C., *Garcia, E. & Clemente, S.
Gmpo de investigacion en Biodiversidad, Ecologia Marina y Conservation (BIOECOMAC)
Departamento de Biologia Animal, Edafologia y Geologia, Universidad de La Laguna
* Autor de correspondencia: eliseba8@hotmail.com
RESUMEN
El cambio climatico trae consigo problemas como el calentamiento y la acidificacion
de los oceanos que pueden producir efectos significativos sobre los organismos y ecosistemas
marinos. El objetivo del presente trabajo es conocer como afecta la combination de estos dos
estresores a la fertilizacion y el desarrollo embrionario temprano del erizo de mar Paracen-trotus
lividus. Se realizo un experimento donde se manipularon simultaneamente el pH y la
temperatura del agua de mar. Para ello, las variables estudiadas fueron la tasa de fecundation
y la tasa de division celular en tres tiempos diferentes despues de la insemination. Los resul-tados
obtenidos muestran una cierta tolerancia de la especie a los futuros escenarios de cam-bio
climatico. Sin embargo, estudios previos han encontrado efectos mas severos en etapas
mas avanzadas del desarrollo embrionario. Por ello es necesario seguir realizando investiga-ciones,
valorando los efectos combinados de los estresores, en otras fases del ciclo de vida de
la especie objeto de estudio.
Palabras claves: acidificacion de los oceanos, calentamiento global, desarrollo em-brionario,
erizo de mar, Paracentrotus lividus.
ABSTRACT
Climate change creates problems since global warming and ocean acidification can
produce significant effects on marine organisms and ocean ecosystems. The aim of this study
was to determine how the combination of these two stressors affects fertilization and early em-bryonic
development of the sea urchin Paracentrotus lividus. An experiment with a simulta-neous
manipulation of the pH and temperature was carried out. In order to do this, the studied
variables were fertilization and cell division rates at three different times after insemination.
Results showed some tolerance of the species to future climate change scenarios. However,
previous studies have found more severe effects at later stages of early embryonic develop-ment.
In this sense, further research assessing the combined effects of stressors in other life
cycles phases is needed.
Keywords: ocean acidification, global warming, embryonic development, sea urchin,
Paracentrotus lividus.
251
1. INTRODUCTION
Con la llegada de la Revolucion Industrial las emisiones de CO: a la atmosfera han au-mentado
en tomo a un 80% (IPCC, 2013) principalmente debido al uso de combustibles fo-siles.
Esto, junto con el aumento de otros gases contaminantes, ha provocado un proceso de
cambio global en las condiciones medioambientales que es lo que denominamos el cambio cli-matico.
Entre los principales problemas derivados de los procesos de cambio climatico en el
medio marino destacan, por sus efectos en la fisiologia y distribucion de los organismos ma-rinos,
el calentamiento y la acidificacion de los oceanos.
El calentamiento global no solo provoca el deshielo de los casquetes polares y en con-secuencia
el aumento del nivel del mar, sino ademas un progresivo aumento de la tempera-tura
de los oceanos. El oceano ha absorbido mas de un 80% del calor incorporado al sistema
climatico y, en consecuencia, la temperatura media del mar ha aumentado unos 0,6°C en los
ultimos 100 anos (IPCC, 2013). Se espera que para el ano 2 100 la temperatura superficial del
mar (SST) se incremente de 0,3 a 4,8°C (IPCC, 2013).
El proceso de acidificacion de los oceanos consiste en una progresiva disminucion del
pH del agua de mar por la absorcion del C02 antropogenico liberado a la atmosfera. La incor-poracion
de este carbono ha provocado que el pH disminuya 0,1 unidades en las ultimas deca-das
(IPCC, 2013) y se espera una mayor reduccion del pH en el futuro. Las predicciones apuntan
hacia una disminucion del pH de la superficie del mar de 0,4 unidades para el ano 2100 (IPCC,
20 1 3) y de 0,7 unidades para el 2300 (CALDEIRA & WICKET, 2003; ORR et al. 2005).
La acidificacion de los oceanos afecta sobre todo a los invertebrados que poseen es-tructuras
calcareas (conchas, esqueletos, espiculas, etc). Esto es debido a que cuando el C02
se disuelve en el mar reduce el pH y se forman acidos que liberan atomos de hidrogeno, que
luego se combinan con moleculas de carbono originando bicarbonato (HC03 ), disminuyendo
de este modo la formacion de minerales de CaCCf (DONEY et al. 2009) necesarios para la
formacion de los caparazones y esqueletos de los organismos calcificantes (RIES, 2011).
Los efectos directos del calentamiento y la acidificacion del mar en los organismos
marinos son cada vez mas conocidos (KROEKER et al. 2010; BYRNE et al. 2011), pero la
informacion sobre los efectos combinados de estos dos estresores climaticos es mucho mas
escasa. Los estudios que valoran los efectos de la interaccion del aumento de la temperatura
y la disminucion del pH del mar son mucho mas realistas, ya que en el medio los organismos
marinos se enfrentan a la presion combinada del calentamiento y la acidificacion de los oce-anos
(DONEY et al. 2012). Estos factores determinan en gran medida la distribucion, la fi-siologia,
la morfologia y el comportamiento de los organismos (DONEY et al. 2009).
En los invertebrados marinos, las primeras etapas de desarrollo (fertilizacion, embrio-genesis
y desarrollo larvario) son las mas sensibles al estres ambiental que los estados poste-riores
del ciclo de vida (DUPONT & THRORNDYKE, 2009). En el caso concrete de los
equinodermos, se trata de especies con estructuras calcareas que son utilizadas ampliamente
como modelos para estudiar los efectos del cambio climatico sobre los procesos fisiologicos
tales como la respiracion, la alimentacion, fertilizacion y el desarrollo larvario (KURIHARA
& SHIRAYAMA, 2004; DUPONT & THRORNDYKE, 2008). Ademas, en concreto los eri-zos
de mar son herbivoros clave en muchos ecosistemas costeros, esenciales para el mante-nimiento
de la estructura y funcionalidad de los ecosistemas bentonicos, por lo que su estudio
tiene implicaciones que van desde los procesos fisiologicos que ocurren en el organismo a
cambios a nivel de ecosistema (PAINE, 1966; HARROLD & PEARSE, 1987; LEBLANC et
al. 2005; HERNANDEZ etal. 2008).
252
Como la mayoria de los invertebrados marinos, los erizos de mar liberan sus game-tos
a la columna de agua donde se produce la fecundacion. Cuando las condiciones fisico-quimicas
del agua de mar cambian, sus gametos se ven expuestos a una variedad de factores
estresantes, tanto naturales como antropogenicos, que pueden comprometer las primeras eta-pas
de desarrollo, por ejemplo limitando la capacidad de general' estructuras calcareas (KU-RIHARA
& SHIRAYAMA, 2004; MELZNER et al. 2009). Estudios previos ban mostrado
efectos positivos del calentamiento en la fecundacion (HAGSTROM & HAGSTROM, 1959;
M1TA et al. 1984), asi como efectos negativos en el desarrollo larvario (BYRNE et al. 2011).
Los etectos adversos de la acidificacion sobre la fertilizacion y el desarrollo temprano tam-bien
se han demostrado en ciertas especies de equinoideos (KURIHARA & SHIRAYAMA,
2004; DUPONT et al. , 2008; HAVENHAND et al., 2008; CLARK et al., 2009; MARTIN
et al, 2011; MOULIN et al., 2011), con la excepcion de un estudio que no encontro efecto
del pH sobre la fertilizacion de erizo de mar, concretamente en la especie Heliocidaris eryth-rogramma
(Valenciennes, 1846) (BYRNE et al. 2009). En el caso de la especie Paracen-trotus
lividus (Lamarck, 1819), se han demostrado efectos antagonistas sobre la fertilizacion
y el desarrollo temprano producidos por el calentamiento del agua, que tienden a acelerar
estos procesos, y la acidificacion, que retrasa el desarrollo temprano (COHEN et al., 2013).
Sin embargo, son aun pocos los estudios que han evaluado los efectos combinados de la
temperatura y el pH del mar aunque muy necesarios dadas las interacciones que otros auto-res
han encontrado (BYRNE et al. 2009; SHEPPARD-BRENNAND et al. 2010; BYRNE
et al. 2010 a & b).
En el presente trabajo, se estudio el efecto de las variables de cambio climatico (tem-peratura
y pH) en el desarrollo temprano del erizo de mar Paracentrotus lividus. Esta especie
de apetencias templadas se distribuye por toda la costa Mediterranea y el este del Oceano
Atlantico Norte (desde Marruecos a Escocia), incluyendo a las islas Canarias. Se suele en-contrar
en habitats rocosos, tanto en zonas del intermareal como del submareal somero (BOU-DOURESQUE
& VERLAQUE, 2001). En Canarias esta especie encuentra su limite
meridional donde la temperatura superficial del mar (SST) oscila entre 19-25 °C (HER-NANDEZ
et al. 2009) contrastando con los 13-28 °C del Mediterraneo oriental (NYKJAER,
2009), lo que sugiere que esta poblacion podria ser mas susceptible a los procesos de cambio
climatico (COHEN et al. 2013). El objetivo concreto planteado para este trabajo fue conocer
el efecto combinado de los aumentos previstos en la temperatura y en la acidificacion del mar
en la fecundacion y desarrollo temprano de las poblaciones de P. lividus de las islas Canarias.
2. MATERIALES Y METODOS.
2.1. Condiciones del laboratorio y parametros del agua de mar
Se manipulo la temperatura y el pH del agua de mar, para utilizar ambos parametros como
factores estresores combinados en experimentos manipulativos en el laboratorio. Para la re-alization
del experimento se utilizaron cuatro tanques que se llenaron de agua de mar fil-trada
mediante un sistema de recirculation de agua provisto de filtros de carbono activo
(DRYDEN AQUA); filtros de poliamida de 50 pm, 10 pm y 1 pm (UNICEL); asi como un
sistema de purification por luz ultravioleta (UV-C AQUAEL, 1 1 W) (Fig. 1 A). En cada tan-que,
la temperatura se controlo mediante unos termostatos (EHEIM AQUATICS, 50 W) de
forma que un tanque se mantuvo a 19 °C (temperatura tipica de Primavera en las islas Cana-rias),
otro a 21 °C (temperatura maximas registradas excepcionalmente en Primavera en las
253
Figura 1.- A. Tanque que contiene los recipientes experimentales con agua de mar filtrada mediante un
sistema de recirculacion de agua provisto de filtros. B. Sistema de computacion y valvula solenoide
(AquaMedic) para el control del CO: .
Figura 2.- A. Desove de las hembras en un bote de 1 00 ml. B. Tubos eppendorf con esperma en hielo.
Figura 3.- Imagcn de los diferentes estadios de division celular observados al microscopio optico: NF
(no fertilizado), F (con membrana de fertilizacion), 2C (con 2 celulas), 4C (con 4 celulas) y +4C (con
mas de 4 celulas).
254
islas), otro a 23 °C (temperatura estimada para el ano 2050; IPCC, 201 3) y un tanque a 25 °C
(valoi estimado para el 2100; IPCC, 2013). El pH del agua de mar se controlo mediante un
sistema de computacion y valvula solenoide (AquaMedic) que burbujea CO^ directamente en
el agua con una resolucion de ±0,01 unidades (Fig. IB). Se ajusto el pH y se mantuvo con-trolado
con un sensor y un ordenador de pH, de tal manera que se establecieron tres trata-mientos
diferentes: 8, 1 (considerado como control, es el pH al que se encuentra el agua de mar
de las islas C'anarias), 7,7 (pH estimado para el ano 2100; IPCC, 2013) y 7,4 (valor estimado
para el ano 2300; IPCC, 2013) (Fig. 1A). Para verificar el mantenimiento correcto de las va-riables
experimentales, se realizo un seguimiento diario de la temperatura y el pH del agua de
mar en los experimentos mediante un sensor de temperatura y pH (Metrohm mobile meter).
Fa salinidad se controlo mediante un conductimetro de mano (COND 3 1 5i).
2.2. Recoleccion de especimenes y bioensayos
Fa especie objeto de este estudio fue el erizo de mar Paracentrotus lividus. Fos individuos se
recolectaron en noviembre de 2013 en las Galletas, en la isla de Tenerife (Coordenadas: Fa-titud
28° 16’ 07” N, Fongitud 16° 36’ 20” W). Para controlar cualquier variabilidad espacial
se escogieron de manera aleatoria 5 hembras y 4 machos (EVAN & MARSHAFF, 2005) a los
que se le administro una inyeccion de 2 ml de KC1 en la cavidad perivisceral para inducir el
desove. Fas hembras desovaron en un bote de 100 ml (Fig. 2A), mientras que a los machos
se les extrajo el esperma mediante una pipeta. El esperma se introdujo en un tubo eppendorf
y se mantuvo en hielo hasta su utilizacion (Fig. 2B).
Fos huevos y el esperma se mezclaron para la fertilizacion en botes de 1 00 ml en can-tidades
de 1:1500 (huevo:esperma) en las condiciones de pH experimentales y se colocaron
en los tanques con las condiciones de temperatura deseadas. Por cada pH y temperatura se uti-lizaron
nueve replicas que se mantuvieron por un tiempo determinado despues de producida
la inseminacion: 15 min, 105 min y 210 min. De esta forma pudimos observar el desarrollo
embrionario de la especie y sus diferentes estadios. Asi, se obtuvieron tres replicas por cada
combinacion de factores, temperatura, pH y tiempo tras la inseminacion. Despues de que las
replicas se sometieran a las condiciones experimentales durante el tiempo establecido, se paro
el desarrollo larvario usando formaldehido al 4%, 1 ml por cada vaso de 100 ml.
Para evaluar la tasa de desarrollo embrionario se estimo el numero de huevos en los di-ferentes
estadios de division celular: no fertilizados, celulas con membrana de fertilizacion,
embriones con 2 celulas, con 4 celulas y con mas de 4 celulas (Fig. 3). Para ello, de cada re-plica
se sacaron 3 alicuotas de 0,2 ml para su observacion y cuantificacion al microscopio.
2.3. Analis is de los datos
Con los datos obtenidos se realizo un analisis multivariante de la varianza por permutaciones
(PERMANOVA) (ANDERSON, 2001), para evaluar los efectos combinados de la tempera-tura
del agua de mar y el pH sobre la tasa de desarrollo embrionario y division celular de Pa-racentrotus
lividus. Se utilizo un diseno de 3 vias con los factores fijos “Temperatura” (4
niveles de variacion), “pH” (3 niveles de variacion) y “tiempo post-inseminacion” (3 niveles
de variacion). Se utilizaron las distancias euclideas de las 5 variables estudiadas para valorar
el desarrollo embrionario del erizo: huevos no fecundados, huevos con membrana de fertili-zacion,
embriones de 2 celulas, de 4 celulas y de mas de 4 celulas. Fos terminos significati-vos
del modelo se analizaron con comparaciones a posteriori dos a dos ejecutadas por
permutaciones (ANDERSON, 2001). Cuando no se obtuvieron suficientes permutaciones
para una prueba valida, los p-valores se corrigieron con el metodo de Monte Carlo. Final-
255
mente, se realizo un analisis de ordenacion de coordenadas principales (PCO) para identifi-car
las diferencias y similitudes de las muestras.
Todos los analisis se llevaron a cabo con el paquete estadistico PRIMER 6 & PER-MANOVA
+ v. 1.0.1.
3. RESULTADOS.
Segun el analisis PERMANOVA de las 5 variables de desarrollo embrionario de Pci-racentrotus
lividus estudiadas (proporcion de huevos no fecundados, huevos con membrana
de fertilizacion, embriones de 2 celulas, de 4 celulas y de mas de 4 celulas) la interaccion de
factores, “Temperatura x pH x Tiempo” fue significativa (Tabla 1). Este resultado demuestra
que la tasa de huevos en diferentes etapas de desarrollo varia de una manera distinta segun la
combinacion de los diferentes tratamientos de Temperatura, pH y Tiempo analizados. Por lo
tanto, fue necesaria la realizacion de comparaciones a posteriori por pares para determinar las
diferencias entre niveles de cada uno de estos factores. Asi, se encontraron diferencias en el
desaiTollo embrionario de la especie entre las temperaturas, sobre todo a los 105 min de la fer-tilizacion
donde aparecieron diferencias en todos los niveles de pH estudiados, y en menor me-dida,
a los 210 min post-inseminacion (Tabla 2). Por otro lado, se encontraron diferencias
entre los niveles de pH considerados sobre todo a temperaturas bajas ( 19 °C y 21 °C) y en las
etapas mas avanzadas de desarrollo embrionario (105 min y 210 min) (Tabla 3).
Mediante el analisis de ordenacion de PCO observamos los resultados de una manera
mas global (Fig. 4). La ordenacion de las muestras pone de manifiesto patrones de variacion
claros de las muestras segun el tiempo transcurrido tras la inseminacion. Ademas se observa,
que a los 15 min post-inseminacion, las muestras sometidas a pH bajo (7,4), presentan un mayor
numero de huevos sin fecundar. A los 105 min de la fertilizacion en la ordenacion se aprecia
una diferencia entre las muestras mantenidas a 1 9 °C y el resto, especialmente a pH bajo, exis-tiendo
un mayor numero de huevos fecundados que muestran membrana de fertilizacion, que
de huevos con 2 celulas; por lo tanto, en estas condiciones experimentales de baja temperatura
y pH acido el desarrollo embrionario se ralentizo. En el gmpo de los 210 min observamos di-ferencias
mas claras en el desarrollo embrionario de las muestras segun las temperaturas ex-perimentales;
las muestras sometidas a la temperatura mas bajas (19 °C) y el pH mas bajo (7,4)
presentaron una mayor proporcion de huevos en estadios menos desarrollados (huevos con 2
celulas) que el resto, mientras que con las temperaturas mas altas (23 °C y 25 °C) se encontro
un mayor numero de huevos en etapas mas avanzadas de desarrollo embrionario (huevos de
mas de 4 celulas). En general, cuanto mas bajo fue el pH mayor fue la proporcion de huevos
sin fecundar a los 15 min del desarrollo embrionario y mayor la proporcion de huevos con
membrana de fertilizacion sin escision a los 105 y a los 210 min. Sin embargo, las altas tem-peraturas
provocaron un aumento de la proporcion de huevos en etapas mas avanzadas del des-arrollo
embrionario (uno, dos o mas divisiones), contrarrestando asi el efecto del pH.
4. DISCUSION
Este estudio demuestra la capacidad de Paracentrotus lividus para soportar los efectos
combinados de la disminucion de los niveles de pH y el aumento de las temperatura en el agua
de mar causados por los procesos del cambio climatica que se esperan para un futuro proximo.
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#C pH 7.7
[ReiomWanc*. D1 Euclidean distance
PC01 (56.7% of total variation)
Figura 4.- Ordenacion de Componentes Principales (PCO) que muestra el efecto combinado de la tem-peratura
y pH del agua de mar sobre tasa de escision de Paracentrotus lividus a 15, 105 y 210 minutos
despues de la inseminacion.
El desarrollo embrionario de la especie mostro tolerancia al aumento de la temperatura
y disminucion del pH del agua de mar, produciendose los procesos de fertilizacion y division
celular temprana en todas las combinaciones de pH y temperatura estudiadas. Sin embargo,
se registro un retraso en el desarrollo embrionario en las condiciones de menor pH con tem-peraturas
optimas para la especie de 19-21 °C, en concordancia con estudios anteriores (MOU-LIN
et al. 2010; COHEN et al. 2013), mientras que otros solo lo han registrado a niveles de
pH extremadamente bajos (7,0) (MARTIN et al. 2011). Este efecto negativo del pH sobre el
desarrollo embrionario temprano de P. lividus mejoro con el aumento de las temperaturas, lle-gando
incluso a desaparecer con las temperaturas mas altas (23 y 25°C) apareciendo una
mayor proporcion de huevos en estadios avanzados.
Trabajos previos han obtenido resultados variables en los estudios del efecto del ca-lentamiento
y la acidificacion del agua de mar sobre P. lividus. En cuanto a los efectos del
pH del agua de mar, MOULIN et al. (2010) observo una reduccion en la fecundacion, asi
como una mayor sensibilidad en el desarrollo temprano de esta especie a rangos de pH < 7,6.
COHEN et al. (2013) obtuvieron resultados incluso mas negativos del efecto de la acidifica-cion
del agua de mar, manifestandose en un retraso significativo en la fecundacion pero sin
llegar a observarse problemas en la viabilidad de los gametos. Al contrario, en los resultados
257
de MARTIN et al. (201 1) no se observaron efectos significativos sobre la fecundacion de P.
lividus en condiciones de pH superiores a 7,0, los autores solo observaron un ligero retraso
en el desarrollo, lo que puede deberse a las condiciones experimentales con temperaturas re-lativamente
mas altas que en el resto de estudios (20 °C) (COHEN et al. 2013). Conside-rando
el efecto del aumento de la temperatura sobre P lividus, se ha demostrado previamente
una aceleracion en la fecundacion y una mejora en el desarrollo temprano de la especie
(COHEN etal. 2013).
La novedad del presente estudio radica en la combinacion de los efectos del calenta-miento
y la acidificacion del agua de mar, considerados ambos factores estresores de forma
conjunta. En nuestros resultados, se observo claramente un retraso de la fertilizacion y de las
primeras etapas de desarrollo embrionario de P. lividus, provocado por la disminucion del
pH, mas concretamente por el pH 7,4, valor pronosticado para el ano 2300 si las condiciones
de cambio climatico se mantienen (IPCC, 2013). Sin embargo, este efecto se vio amortiguado
por el aumento de las temperaturas del agua, sobre todo por las temperaturas mas altas (23 y
25 °C). Por lo tanto, estos resultados resaltan el efecto conjunto de ambas variables ambien-tales
en la viabilidad de las especies marinas y la necesidad de la consideracion de ambos pa-rametros
de forma conjunta en futuros diseiios experimentales encaminados a valorar las
consecuencias del cambio climatico.
La fecundacion externa es una de las principales etapas que determinan el numero de
individuos que llegaran a estadio adulto, por tanto, es una etapa crucial para el mantenimiento
de las poblaciones de equinoideos donde influyen multitud de factores ambientales que de-terminan
la seleccion natural de las distintas especies. Cuando aumenta la temperatura del
mar se produce un aumento de la motilidad de los espermatozoides debido a una disminucion
de la viscosidad del agua (HAGSTROM & HAGSTROM, 1 959; BYRNE et al. 2009; COHEN
et al. 2013), esto puede favorecer la fertilizacion y explicar una aceleracion del desarrollo
embrionario del erizo. Por otra parte, el hecho de que la disminucion del pH solo tenga efec-tos
destacados a niveles de pH 7,4 puede ser por la propia tolerancia de los espermatozoides
a niveles de pH bajo. Se sabe que un pH bajo del agua de mar disminuye el pH intemo de los
espermatozoides, favoreciendo la motilidad de estos (CHRISTEN et al. 1986). Al contrario,
en el desarrollo temprano, una vez que se ha producido la fecundacion, se produce el embrion
un aumento del pH intracelular que favorece la sintesis de proteinas, la replicacion del DNA,
y los movimientos citoplasmaticos del material morfogenetico. Cambios de los niveles de pH
extracelular puede afectar al pH intracelular, que puede explicar el retraso observado en las
primeras etapas de desarrollo a temperaturas bajas (19 y 21 °C) (CIAPA& PHILIPPE, 2013).
Este estudio demuestra que el erizo de mar P. lividus es una especie tolerante a los fu-turos
escenarios de cambio climaticos predichos por el IPCC (2013). Sin embargo, unica-mente
se ha analizado el desarrollo embrionario temprano, por lo que los efectos encontrados
en etapas mas avanzadas como los estadios larvarios pueden ser mas severos para su super-vivencia
(MOULIN et al. 2010; MARTIN et al. 2011; COHEN et al. 2013). Asimismo, el au-mento
de las temperaturas y la disminucion de pH del agua de mar, no son los unicos factores
de estres que pueden afectar a los organismos marinos, existen otras condiciones ambienta-les
como la variacion de la salinidad del mar, o la aparicion de especies invasoras, que actuan
en sinergia con los procesos de cambio climatico.
Para bien o para mal, el calentamicnto y la acidificacion de los oceanos provocados por
el cambio climatico, afectaran a los organismos marinos produciendo un desequilibrio en los
ecosistemas, ya sea por la proliferation de una especie o la reduction de otras. Es necesario
seguir realizando investigaciones de los efectos del cambio climatico sobre los organismos que
258
componen el medio marino de una manera conjunta, analizando el efecto combinado de los
estiesores de cambio climatico y estudiando los cambios futuros que pueden aparecer en las
relaciones entre organismos, el propio medio e incluso con el ser humano.
5. AGRADECIMIENTOS
Agradecer al Proyecto "ACIDROCK’ del Ministerio de Economia y Competitividad
que ha subvencionado este trabajo de Grado en Biologia.
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Tabla 1 .- Resultados del analisis PERMANOVA de 3 vlas de la tasa de escision de Paracentrotus livi-dus,
incluyendo las cinco variables estudiadas (huevos no fecundados, celulas con membrana de ferti-lizacion,
embriones con 2 celulas, con 4 celulas y con mas de 4 celulas), T: temperatura, pH, Ti: tiempo
despues de la inseminacion.
Fuente Variacion gl SC MC Pseudo-F p (perm)
pa
3 15158 5052,6 50,975 0,001
pH 2 1529,2 764,61 7,7142 0,001
Ti 2 3,20E+05 1 ,60E+05 1615,8 0,001
TaxpH 6 2598,9 433,15 4,37 0,001
Ta
xt 6 42144 7024,1 70,866 0,001
pHxt 4 3842,5 960,63 9,6918 0,001
TaxpHxt 12 5254,2 437,85 4,4174 0,001
Res 288 28546 99,118
Total 323 4,19E+05
261
Tabla 2 - Resultados de los analisis a posteriori dos a dos que examinan la interaccion signi-ficativa
de los factores de “Temperatura x pH x tiempo despues de la inseminacion por pares
de los niveles del factor Temperatura, obtenidos en el analisis PERMANOVA de la tasa de es-cision
de Paracentrotus lividus.
15 min 105 min 210 min
pH t p(perm) t p(perm) t p(perm)
19°C vs 21°C 1,8624 0,064 3,716 0,001 4,0683 0,001
19°C vs 23°C 0,52938 0,697 5,7052 0,001 5,314 0,001
8
19°C vs 25°C 1,7855 0,008 10,351 0,001 4,8275 0,001
21°C vs 23°C 2,9719 0,004 7,5814 0,001 0,14516 0,024
21°C vs 25°C 3,4991 0,002 8,4137 0,001 1,8212 0,062
23°C vs 25°C 2,4235 0,065 14,122 0,001 2,2597 0,96
19°C vs 21°C 1,146 0,272 4,0544 0,001 4,6294 0,001
19°C vs 23°C 0,61659 0,605 6,1557 0,001 6,5648 0,001
7,7
19°C vs 25°C 1,42 0,137 8,3375 0,001 5,8566 0,001
21°C vs 23°C 1,2751 0,21 4,6634 0,001 2,1189 0,033
21°C vs 25°C 3,8043 0,001 8,4711 0,001 1,699 0,531
23°C vs 25°C 4,1437 0,001 10,772 0,001 0,70083 0,087
19°C vs 21°C 0,59186 0,678 7,1415 0,001 8,6771 0,001
19°C vs 23°C 1,5872 0,119 8,5276 0,001 13,755 0,001
7,4
1 9°C vs 25°C
21°C vs 23°C
1,5149
1,4279
0,123
0,162
13,271
3,429
0,001
0,001
9,8558
6,0218
0.001
0,001
21°C vs 25°C 1,8034 0,049 6,0668 0,001 2,7202 0,005
23°C vs 25°C 1,1818 0,255 9,7487 0,001 2,549 0,016
Tabla 3.- Resultados de los analisis a posteriori dos a dos que examinan la interaccion significativa de
los factores de “Temperatura x pH x Tiempo despues de la inseminacion” por pares de los niveles de fac-tor
pH, obtenidos en el analisis PERMANOVA de la tasa de escision de Paracentrotus lividus.
1 5 min 105 min 2 1 0 min
Temp. t P(perm) t P(perm) t P(perm)
8 vs 7,7 0,63547 0,636 2,7089 0,004 1,8107 0,046
19°C 8 vs 7,4 1,7401 0,337 6,4384 0,001 4,8356 0,001
7,7 vs 7,4 0,98877 0,066 2,4413 0,008 2,571 0,009
8 vs 7,7 3,4638 0,002 3,5432 0,001 1,106 0,27
2 1°C 8 vs 7,4 2,8734 0,058 4,4161 0,001 3,1101 0,003
7,7 vs 7,4 1,7571 0,004 1,8484 0,046 2,9096 0,008
8 vs 7,7 0,88221 0,431 1,9785 0,022 0,47313 0,448
23°C 8 vs 7,4 1,8056 0,089 2,2917 0,009 0,79162 0,704
7,7 vs 7,4 1,8901 0,056 1,5513 0,099 1,1958 0,243
8 vs 7,7 1,2173 0,229 1 ,6005 0,117 0,40012 0,756
25°C 8 vs 7,4 3,3503 0,004 3,625 0,001 1,5325 0,138
7,7 vs 7,4 3,3877 0,002 2,3123 0,004 1,3581 0,186
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